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一． 常用样本 1．血清： 用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 2．血浆： 可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3．细胞培养物上清： 细胞培养物于室温1000g，离心10分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。 4．尿液： 无菌收集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保存尿样，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。 5．组织匀浆： 将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置过夜，再经过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。 ELISA法定量检测人细胞液、体液以及组织匀浆中8羟基脱氧鸟苷的含量。 二．如果采集的实质器官则要求： 1、 器官实质不能太小。2、以采集实质性病灶区为佳：如淋巴结、心脏、非、肺、脾以及肠管等病毒、病菌聚集的地方为佳。3、同一病例装入同一容器，并做好标记。4、应在0-8℃的低温储存和运输。 5、实质性器官的处理： 5.1、取实质性器官约0.5mg左右，充分剪碎或研磨 5.2、加入约500ul的PBS/生理盐水，充分混匀 5.3、离心5000rmp x10min，去上清 5.4、-20℃保存，作为待检标本（切勿反复冻融） 三．体液（常见的包括血清、血浆、唾液以及尿液等）的处理方式 1、血液包括血浆和血清，它们的主要区别就是：血清凝血而血浆不凝血，所以它们的处理方式也就不一样 1.1、采集血浆时一般不加抗凝剂（主要为枸橼酸盐和柠檬酸盐），采集后立即离心800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用； 1.2、如要采集血清，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用； 2、胃液和唾液的采集方式一般现采现用，但是一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶，最好的采集的时间时空腹采集； 3、尿液的采集方式基本和唾液一样的，即现采现用，但是一般隔夜尿不采集； 4、组织提取液如肺泡灌洗液等，采集后离心分离，800-1000rmp x 5min，取上清，-20℃或4℃保存备用； 四．粪便以及天然孔排泄物：采集后一般现用PBS/生理盐水溶解，充分混匀，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用； 五、表达产物的检测 （一）真核表达产物 1、 细胞上清（分泌性蛋白） 1.2、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理； 1.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmp x10min，吸取上清至另一10ml离心管中，10000rmp x10min， -20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理； 2、 细胞裂解物（非分泌性蛋白） 2.1、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，然后用001M PBS（pH 7.4）将细胞吹下至10ml离心管，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀转移至1.5ml离心管中， DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理； 2.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀移至另一10ml离心管中，0.01M PBS（pH 7.4）重悬，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀移至1.5ml离心管中， DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清， -20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理； （二）原核（大肠杆菌表达系统）表达产物 1、表达上清（非融合性蛋白） 直接将培养物和上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理； 2、菌体裂解物（融合性蛋白） 直接将培养物和上清吸出，10000rmp x10min，弃上清，沉淀用PBS洗一遍，500-800rmp x10min，弃上清，DDW重悬沉淀，冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；
Author: GenAsia
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